Autoklav steriliseringseffekt verifiering

Ett av de väsentliga laboratorieinstrumenten i ett mikrobiologilaboratorium är sterilisatorn, där autoklaver är den mest använda typen. Enligt GB 4789.1-2016 bör laboratorieutrustning regelbundet inspekteras och/eller kalibreras (med lämplig märkning), underhållas och servas för att säkerställa operationell prestanda och säkerhet. Men genomgår din sterilisator liknande inspektioner? Om sådan validering krävs, hur ska den genomföras?

Idag kommer vi att sammanfatta de viktigaste aspekterna av validering av steriliseringseffektivitet för autoklaver.

De vanliga metoderna för validering av autoklavsteriliseringseffektivitet inkluderar den kemiska indikatormetoden, metoden med fast punkttermometer, den självgjorda temperatursondmetoden och den biologiska indikatormetoden. Principerna bakom dessa metoder är liknande, främst med fokus på att verifiera om temperaturen inuti sterilisatorn når den erforderliga nivån under sterilisering. Beroende på laboratoriets specifika förhållanden kan en eller flera metoder väljas för validering.

1. Kemisk indikatormetod
Princip: Kemiska indikatorer genomgår färgförändring eller deformation när de utsätts för en specifik temperatur och varaktighet, vilket möjliggör bedömning av om steriliseringsparametrar har uppfyllts.

En vanligt förekommande indikator i laboratorier är 3M autoklavindikatorbandet, som ändrar färg före och efter sterilisering för att indikera effektiviteten. Detta band är tillverkat med värmekänsliga kemikalier och färgutvecklingsmedel tryckta i ränder på ett speciellt tejp. Bandet ska appliceras på utsidan av paketet, med en minsta längd på 5 cm, och pressas fast för bättre vidhäftning och tätning. Efter sterilisering vid 121 ° C under 20 minuter eller 130 ° C under 4 minuter kommer de diagonala vita ränderna på bandet att bli helt svart. Om färgändringen är ojämn eller ofullständig kanske inte paketet uppfyllt steriliseringsförhållanden.

2. Metoden för fast punkttermometer
Princip: Denna metod använder en kvicksilvertermometer som behåller den högsta temperaturen, liknande en traditionell klinisk termometer. Det hjälper till att bestämma den maximala temperaturen som uppnås i autoklaven under sterilisering.

För validering placeras en kvicksilvertermometer i en stor konisk kolv fylld med vatten. Under sterilisering placeras kolven vid både de övre och nedre sektionerna i autoklaven. Efter sterilisering kontrolleras termometeravläsningen mot den erforderliga temperaturen. Denna metod verifierar emellertid endast temperaturen och bekräftar inte om steriliseringsvaraktigheten var tillräcklig, vilket gör den till den mest grundläggande standarden för autoklavvalidering.

3. Självgjord temperatursondmetod
Princip: Denna metod utnyttjar smält- och omkristalliseringsegenskaperna för vissa kemikalier när de utsätts för värme. Genom att täta dessa kemikalier inuti små glasrör och placera dem i autoklaven kan kristallformationen efter sterilisering indikera om den erforderliga temperaturen uppnåddes.

Ett vanligt använt reagens är bensoesyra, som har en smältpunkt på 121–123 ° C, som nära matchar den nödvändiga steriliseringstemperaturen. Under sterilisering tätas fast bensoesyra i ett litet glasrör och placeras inuti autoklaven. Efter processen undersöks kristallstrukturen hos bensoesyran för att bestämma om den erforderliga temperaturen uppnåddes.

Liksom metoden för fastpunktstermometern indikerar detta tillvägagångssätt endast temperaturen och kan inte bekräfta om steriliseringsvaraktigheten var tillräcklig.

4. Biologisk indikatormetod
Princip: Denna metod använder icke-patogen Geobacillus Stearothermophilus-sporer som indikatororganismer för att bedöma effektiviteten av värmesterilisering. Dessa sporer är mycket resistenta mot värme och har ett termiskt motstånd som liknar Clostridium botulinum sporer, vilket gör dem till en pålitlig referens för att utvärdera om autoklaven uppfyller steriliseringskraven.

Biologiska indikatorer finns i tre former:

Sporstopp
Sporremsor
Sporremsor kombinerat med ett odlingsmedium (biologiska indikatorrör)
De biologiska indikatorerna placeras vanligtvis på fem platser i steriliseringskammaren:

Lägre nivå: Front, Middle och Back
Övre nivå: Center
Efter sterilisering ympas indikatorerna i bromokresollila glukospeptonvatten och inkuberas vid 55–60 ° C under 2–7 dagar:

Om odlingsmediet förblir klart och oförändrat i färg har sporerna dödats, vilket indikerar effektiv sterilisering.
Om mediet blir gult och grumligt har sporerna överlevt, vilket innebär att steriliseringsprocessen var ineffektiv.
Samma valideringsmetod gäller både spore -suspensioner och sporremsor.

Många laboratorier använder också kommersiella biologiska indikatorrör, som fungerar på samma sätt som sporupphängningar och remsor. Dessa rör innehåller G. Stearothermophilus -sporer tillsammans med en glas ampull av odlingsmedium. Efter autoklavering krossas glasets ampull inuti röret för att frigöra odlingsmediet, och röret inkuberas vid 56 ° C, med en positiv kontroll inkluderad.

Om sterilisering var ineffektiv kommer livskraftiga sporer att växa och vrida buljongen gul.
Om sterilisering var framgångsrik inaktiveras sporerna och buljongen förblir lila.
Frekvens av autoklavvalidering
För närvarande finns det inga strikta lagstiftningsstandarder som definierar hur ofta autoklaver måste valideras. Laboratorier bör dock fastställa sitt eget valideringsschema och strikt följa det.

För att underlätta drift och tillförlitlig validering rekommenderas kemisk indikatorband och biologiska indikatorrör starkt. Dessa metoder är användarvänliga och ger en omfattande bedömning av steriliseringseffektiviteten.

Viktiga överväganden för autoklavering
(Vissa helt automatiserade importerade autoklaver kanske inte kräver manuell utluftning)

När du använder en autoklav är det viktigt att ta bort kall luft från kammaren medan du introducerar ånga. Avgasventilen bör förbli öppen tills all kall luft utvisas, vilket säkerställer en jämn temperaturfördelning inuti.

Om någon luft förblir inuti kammaren kan tryckmätaren indikera rätt tryck, men den faktiska temperaturen kommer att vara lägre än väntat. Ju mer återstående luft, desto större är skillnaden, vilket leder till ofullständig sterilisering.

(För de som möter luftbubblor i små rör när sterilisering av jäsningsbaserade medier, försök att öka luftutvecklingen för att förbättra resultaten.)